除菌過濾器的操作如何進行?

方法/步驟

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過濾除菌操作時,濾器和過濾瓶等裝置使用前用高壓蒸鍋進行消毒滅菌

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都需要高壓滅菌,不過如果你使用的濾器是進口滅過菌的就不需要了,前提是你沒拆開過。

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KRBB液的配方是：NaCl 118.5mmol/L, CaCl2 2.54mmol/L, KH2PO4 1.19mmol/L, KCl 4.74mmol/L, NaHCO325mmol/L, MgSO4 1.19mmol/L, HEPES 10mmol/L, BSA 1%)。 而10mmol/L HEPES緩沖液配制方法如下：準確稱取HEPES 2.383g，加入新鮮三蒸水定容至。

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你只要有濾膜和配套的過濾器就可以了，一般在超凈工作臺上進行。濾膜用0.22微米或0.45微米兩種規格，指的是濾膜的孔徑大小吧。一般0.22就夠了！

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如果溶液的量比較大，超過500ml，可以采用已滅菌的抽濾瓶，預先墊好0.22um 的濾膜。抽濾瓶滅菌前要檢查封口用紗布或棉花堵牢，使用時，不用在無菌室中進行，只要保證收集瓶無菌狀態就可以。抽濾后，過濾好的溶液在無菌條件下倒進已滅菌的空試劑瓶中。

如果用小量的溶液過濾，無菌室內用一次性注射器和一次性0.22um濾膜（millipore或pall都有賣）就可以。

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過濾的量，如果量小，用注射器加濾器、0.22微米濾膜過濾，濾器加上濾膜后蓋緊，稍旋松，飯盒密封100度蒸餾水煮沸30分鐘滅菌，用來承接無菌糖水的瓶需高壓。用時在無菌操作臺上操作，并先旋緊濾器，注意濾器外流下去的哪怕一滴也會造成染菌；過濾應該是費力的，如果感覺很輕松，則濾膜已破。0.45微米的濾膜一般用于兩次過濾的第一次，以防止0.22堵塞。注射器，若能高壓更好些。

如果量大，正壓可用蠕動泵接皮管接不銹鋼濾器大張濾膜，這些都是要高壓的。負壓可用抽濾。